ISOLASI DAN SKRINING BAKTERI INDIGENOUS DARI AIR RENDAMAN PELEPAH TANAMAN SALAK (Zalacca edulis, Reinw.) YANG BERPOTENSI SEBAGAI BAKTERI SELULOLITIK
NASKAH PUBLIKASI Untuk Memenuhi Sebagian Persyaratan Guna Mencapai Derajat Sarjana S-1 Program Studi Pendidikan Biologi
Disusun Oleh: IMELDA LUSI ANGGRAENI A 420110089
FAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA 2015
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA FAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKAN Jl. A. Yani Tromol Pos I – Pabelan, Kartasura Telp. (0271) 717417, Fax : 7151448 Surakarta 57102
Surat Persetujuan Artikel Publikasi Ilmiah Yang bertanda tangan di bawah ini pembimbing skripsi/tugas akhir: Nama
: Triastuti Rahayu, S.Si., M.Si.
NIK
: 920
Telah membaca dan mencermati naskah artikel publikasi ilmiah, yang merupakan ringkasan skripsi/tugas akhir dari mahasiswa: Nama
: Imelda Lusi Anggraeni
NIM
: A 420 110 089
Program Studi : Pendidikan Biologi Judul Skripsi
: ISOLASI DAN SKRINING BAKTERI INDIGENOUS DARI AIR RENDAMAN PELEPAH TANAMAN SALAK (Zalacca edulis, Reinw.) YANG BERPOTENSI SEBAGAI BAKTERI SELULOLITIK
Naskah artikel tersebut, layak dan dapat disetujui untuk dipublikasikan. Demikian persetujuan dibuat, semoga dapat dipergunakan seperlunya.
Surakarta, 2 April 2015 Pembimbing
Triastuti Rahayu, S.Si., M.Si. NIK. 920
ISOLASI DAN SKRINING BAKTERI INDIGENOUS DARI AIR RENDAMAN PELEPAH TANAMAN SALAK (Zalacca edulis, Reinw.) YANG BERPOTENSI SEBAGAI BAKTERI SELULOLITIK Imelda Lusi Anggraeni (1), A 420 110 089, Triastuti Rahayu (2), Mahasiswa, (2) Staf Pengajar, Program Studi Pendidikan Biologi, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan, Universitas Muhammadiyah Surakarta, 2015.
(1)
ABSTRAK Bakteri selulolitik merupakan bakteri penghasil enzim selulase yang berfungsi untuk mendegradasi selulosa. Bakteri selulolitik dapat ditemukan pada jaringan tumbuhan yang membusuk. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui potensi selulolitik dan karakteristik bakteri hasil isolasi dan skrining bakteri indigenous dari air rendaman pelepah tanaman salak (Zalacca edulis, Reinw.). Parameter yang digunakan adalah isolat bakteri indigenous yang berpotensi sebagai bakteri selulolitik dan karakteristik bakteri selulolitik. Penelitian ini merupakan penelitian eksplorasi, data yang diperoleh dikumpulkan secara sistematis dan disajikan secara informatif. Penelitian dilakukan dengan mengisolasi bakteri menggunakan media Nutrient Agar untuk mendapatkan bakteri dengan karakteristik berbeda kemudian skrining menggunakan media selektif Carboxy Methyl Cellulose Agar (CMC Agar) 1% dengan indikator Congo red 0,1%, diinkubasi pada suhu 280C selama lima hari (bakteri selulolitik ditandai dengan munculnya zona bening di sekitar koloni. Hasil isolasi dan skrining bakteri diperoleh tujuh isolat yang memiliki karakteristik berbeda dan semua isolat tersebut mampu mendegradasi selulosa. Indeks aktifitas selulolitik terbesar pada bakteri selulolitik berkode S3 yaitu 1,27 mm. Bentuk ketujuh isolat bakteri selulolitik yang diperoleh semuanya berbentuk coccus dengan tiga jenis gram negatif dan empat jenis gram positif. Kata kunci: Bakteri selulolitik, air rendaman pelepah tanaman salak, Carboxyl Methyl Cellulose Agar (CMC Agar).
THE ISOLATION AND SCREENING OF INDIGENOUS BACTERIA FROM THE WATER RETTING OF ZALACCA (Zalacca edulis, Reinw.) PLANT STEM THAT HAVE POTENTIAL AS CELLULOLYTIC BACTERIA Imelda Lusi Anggraeni(1), A 420 110 089, Triastuti Rahayu (2), (1) Student, (2)Teaching Staff, Department of Biology Education, Teacher Training and Education Faculty, Muhammadiyah University of Surakarta, 2015.
ABSTRACT Cellulolytic bacteria are bacteria which produce cellulase enzyme which functioned to degrade cellulose. Cellulolytic bacteria can be found in the decomposing plant tissue. This study aims to determine the potential of the cellulolytic and the characteristics of the bacteria from the result of the isolation and screening of indigenous bacteria from the immersion water of Zalacca (Zalacca edulis, Reinw.) plant stem. The parameters that are used in this study are the isolates of indigenous bacteria that have potential as cellulolytic bacteria and cellulolytic bacterial characteristics. This study is an exploratory study, the obtained data is systematically collected and presented informatively. The study is done by isolating the bacteria by using Gelatine Nutrient media to get the bacteria with different characteristics and then the screening by using 1% of Gelatine Carboxy Methyl Cellulose (Gelatine CMC) selective media with 0.1% of Congo red indicator, incubated on 280C for five days (Cellulolytic bacteria were marked by the emergence of a clear zone around the colony). The results of the isolation and screening of the bacteria are the seven isolates which have different characteristics, and all of the isolates are able to degrade cellulose. The largest cellulolytic activity index on the cellulolytic bacteria coded S3 is 1.27 mm. The shapes of the seven isolates of cellulolytic bacteria are all in coccus shapes with three types of gram-negative and four types of gram-positive. Keywords: Cellulolytic bacteria, the water retting of Zalacca plant stem, Gelatine Carboxy Methyl Cellulose (Gelatine CMC).
PENDAHULUAN Di daerah Sleman, Yogyakarta banyak sekali petani yang menanam tanaman salak (Zalacca edulis, Reinw.) sebagai komoditas utama perkebunannya. Menurut informasi dari ketua asosiasi petani salak di daerah tersebut, bahwa dalam satu tahun tanaman salak dilakukan pemotongan pelepah salak sebanyak dua kali setiap sebelum proses pemanenan. Dalam satu rumpun tanaman salak produktif setiap tahunnya mampu menghasilkan potongan pelepah salak kurang lebih sekitar 24 buah. Apabila dikalkulasikan dengan jumlah tanaman salak yang ada, maka dalam satu tahun pelepah salak yang belum termanfaatkan sekitar ± 23.000 truk. Serat pelepah tanaman salak memiliki potensi yang cukup menjanjikan jika diproses dan diolah secara benar. Proses pemanfaatan pelepah tanaman salak memiliki kendala karena pelepah salak termasuk serat alami. Menurut Shibata dan Osman (1988), Kandungan senyawa kimia penyusun serat pelepah tanaman salak adalah selulosa 31,7%, hemiselulosa 33,9%, lignin 17,4% dan silika 0,6%. Dengan komposisi yang demikian, menyebabkan pemisahan satu serat dari sebuah ikatan (bundle) serat cukup sulit, karena selalu saja ada beberapa serat yang saling menempel di dalam sebuah bundle. Pemisahan serat memerlukan proses yang disebut retting. Dalam melakukan retting, petani biasanya melakukan perendaman di tempat-tempat yang biasa tergenang air hujan, sehingga proses ini sangat bergantung pada kondisi alam. Bakteri-bakteri dalam air retting memiliki kemampuan untuk menghasilkan enzim yang spesifik yang membantu proses pemisahan serat. Salah satu bakteri yang terdapat dalam air retting adalah bakteri selulolitik. Bakteri selulolitik merupakan bakteri yang dapat menghidrolisis kompleks selulosa menjadi oligosakarida yang lebih kecil dan akhirnya menjadi glukosa. Glukosa tersebut digunakan sebagai sumber nutrisi dan karbon bagi pertumbuhan organisme ini. Bakteri selulolitik mensintesis seperangkat enzim yang dapat menghidrolisis selulosa. Enzim tersebut adalah enzim selulase. Enzim selulase akan menghidrolisis ikatan (1,4)-ßD-glukosa pada selulosa. Hidrolisis sempurna selulosa akan menghasilkan monomer selulosa yaitu glukosa dan hidrolisis tak sempurna akan menghasilkan
disakarida dari selulosa yang disebut selobiosa (Galbe & Zacchi, 2007). Habitat dari bakteri selulolitik ini terdapat pada jaringan tanaman yang lapuk (Baharudin, 2010), pada tanah (Fikrinda, 2000), dan cairan rumen ruminansia (Balagurunami, 1991). Oleh karena itu, penelitian ini dilakukan untuk mengisolasi dan menskrining bakteri yang berpotensi mendegradasi selulosa (bakteri selulolitik) dari air rendaman pelepah tanaman salak, sehingga ke depannya dapat dimanfaatkan untuk mempercepat proses retting atau pembuatan pupuk. METODE PENELITIAN Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biologi FKIP UMS. Dalam penelitian ini ada beberapa macam data yang harus diambil yaitu hasil isolasi bakteri pada media Nutrient Agar (NA). Sampel bakteri diperoleh dari air rendaman pelepah tanaman salak (Zalacca edulis, Reinw.). Isolat yang tumbuh pada media Nutrient Agar (NA) kemudian dipilih untuk dilakukan streak pada media Nutrient Agar miring. Setelah tahap streak pada media NA miring selesai, kemudian dilakukan pengenceran 10-4 dan menumbuhkannya dalam media NA kembali untuk diamati karakteristiknya yang meliputi pengamatan makroskopis (morfologi koloni). Bakteri yang telah dikarakterisasi dilakukan proses skrining yaitu menumbuhkan masing-masing isolat tunggal pada media CMC agar. Kemudian mengambil data berupa potensi selulolitik dengan menetesi menggunakan Congo red 0,1 %. Setelah itu melakukan pengamatan secara mikroskopis. Pengambilan data sebagai hasil akhir dari penelitian. HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN Hasil dari pengamatan makroskopis dan mikroskopis isolat bakteri terpilih, disajikan pada tabel berikut:
Tabel Karakteristik Bakteri Indigenous dari Air Rendaman Pelepah Tanaman Salak Isolat (S)
Indeks Aktivitas Selulolitik (mm)
Bentuk
Warna
Tepi
Elevasi
Jenis
Bentuk
S1
0,42
Irregular
Putih Susu
Lobate
Cembung
Gram Positif
Coccus
S2
1
Circular
Putih Susu
Rata
Cembung
Gram Negatif
Coccus
S3
1,27
Circular
Putih Kekuningan
Filiform
Cembung
Gram Negatif
Coccus
S4
0,85
Circular
Putih Susu
Filiform
Cembung
Gram Negatif
Coccus
S5
0,41
Irregular
Putih Kekuningan
Undulate
Cembung
Gram Positif
Coccus
S6
0,87
Irregular
Putih Susu
Undulate
Cembung
Gram Negatif
Coccus
S7
0,19
Irregular
Putih Susu
Filiform
Cembung
Gram Positif
Coccus
Makroskopis
Mikroskopis
Hasil pengamatan morfologi koloni, karakteristik ketujuh isolat bakteri terpilih terlihat berbeda-beda. Isolat bakteri dengan kode S1 terlihat memiliki bentuk yang tidak beraturan (irregular), berwarna putih susu, memiliki tepi bergelombang menyerupai bunga, dan memiliki elevasi yang cembung. Isolat bakteri dengan kode S2 terlihat memiliki bentuk circuler (bulat), berwarna putih susu, memiliki tepi yang rata, dan memiliki elevasi yang cembung. Isolat bakteri dengan kode S3 terlihat memiliki bentuk circular, berwarna putih kekuningan, memiliki tepi filiform (menyerupai akar), dan memiliki elevasi yang cembung. Isolat bakteri dengan kode S4 terlihat memiliki bentuk circular, berwarna putih susu, memiliki tepi filiform (menyerupai akar), dan memiliki elevasi yang cembung. Isolat bakteri dengan kode S4 ini memiliki karakteristik yang hampir sama dengan isolat bakteri dengan kode S3. Perbedaannya hanya terletak pada warna isolat saja, pada isolat kode S3 warnanya adalah putih kekuningan. Isolat bakteri dengan kode S5 terlihat memiliki bentuk irregular (tak beraturan), berwarna putih kekuningan, memiliki tepi undulate (bergelombang), dan memiliki elevasi yang cembung. Isolat bakteri dengan kode S6 memiliki bentuk irregular (tak beraturan), berwarna putih susu, memiliki tepi undulate (bergelombang), dan
memiliki elevasi yang cembung. Isolat bakteri S6 ini memiliki karakteristik yang hampir sama dengan isolat bakteri S5. Perbedaannya adalah pada warna bakteri, pada isolat bakteri S5 berwarna putih kekuningan. Isolat bakteri dengan kode S7 terlihat memiliki bentuk irregular (tidak beraturan), berwarna putih susu, memiliki tepi filiform (menyerupai akar), dan memiliki elevasi yang cembung. Hasil pengamatan mikroskopis bakteri selulolitik didapatkan empat isolat jenis gram negatif yaitu S2, S3, S4, dan S6 yang ditandai dengan warna merah/merah muda dan tiga jenis gram positif yaitu S1, S5, dan S7. Bentuk sel isolat bakteri semuanya adalah coccus. S1 (400x)
S1 (1000x)
S2 (400x)
S2 (1000x)
Keterangan: S1 = gram positif S2 = gram negarif Gambar Hasil Pewarnaan Gram dan Pengamatan Mikroskopis
Ketujuh isolat bakteri terpilih yang memiliki karakteristik berbeda semuanya berpotensi sebagai bakteri selulolitik karena semua isolat positif terdapat zona bening di sekitar koloninya. Bakteri selulolitik merupakan bakteri yang dapat menghidrolisis kompleks selulosa menjadi oligosakarida yang lebih kecil dan akhirnya menjadi glukosa. Glukosa tersebut digunakan sebagai sumber nutrisi dan karbon bagi pertumbuhan organisme ini. Bakteri selulolitik mensintesis seperangkat enzim yang dapat menghidrolisis selulosa. Enzim tersebut adalah enzim selulase. Mikroba mensintesis enzim selulse selama tumbuh
pada media selulosa (Ibrahim dan El-diwany, 2007). Fikrinda et al., (2000) menyatakan aktivitas sekresi enzim selulosa ditandai dengan nilai indeks aktivitas selulotik yang merupakan perbandingan diameter zona bening terhadap diameter koloni isolat yang ditumbuhkan pada media agar bersumber karbon CMC. Ketujuh isolat bakteri selulolitik yang terpilih memiliki kemampuan mendegradasi selulosa yang berbeda-beda. Perbedaan ini disebabkan karena masing-masing bakteri memiliki karakter spesifik yang berbeda. Hal ini dapat dilihat dari hasil pengamatan makroskopis yaitu morfologi koloninya dan pengamatan secara mikroskopis yaitu jenis gram dan bentuk sel bakterinya. Setiap bakteri selulolitik menghasilkan kompleks enzim selulase yang berbeda-beda tergantung dari gen yang dimilikinya dan sumber karbon yang digunakan. Penelitian ini belum mengidentifikasi bakteri sampai pada tingkatan genus. Oleh sebab itu disarankan untuk penelitian selanjutnya agar mengidentifikasi sampai ke tingkat genus bahkan spesifikasinya. Nilai indeks aktivitas selulolitik dijadikan sebagai dasar untuk mengetahui potensi masing-masing isolat sebagai bakteri selulolitik. Semakin besar nilai indeksnya, maka potensi isolat tersebut akan semakin besar pula. Hal ini dapat dijadikan indikator dalam menentukan isolat yang paling efektif dan efisien untuk dimanfaatkan sebagai sumber inokulum dalam proses retting pelepah tanaman salak (Zalacca edulis, Reinw.) maupun sumber serat alami yang lainnya atau proses pembuatan pupuk. Berdasarkan gambar 4.3, isolat yang memiliki kemapuan mendegradasi selulosa paling kuat adalah isolat bakteri dengan kode S3 yaitu memiliki diameter zona bening sebesar 1,27 mm. Isolat bakteri yang memiliki kemampuan mendegradasi selulosa paling lemah dan hampir tidak terlihat zona beningnya adalah isolat bakteri dengan kode S7 yaitu memiliki diameter zona bening sebesar 0,19 mm. S3
S4
S5
Gambar Uji Potensi Selulolitik
Berdasarkan tabel 4.1 terlihat bahwa isolat bakteri yang memiliki diameter koloni yang besar belum tentu menghasilkan zona bening yang besar. Sebaliknya isolat bakteri yang memiliki diameter koloni yang kecil belum tentu memiliki zona bening yang kecil. Perbedaan antara nilai diameter koloni dan diameter zona bening yang ditunjukkan oleh masing-masing isolat dibandingkan dengan nilai aktivitas selulolitiknya dapat dijelaskan sebagai fenomena dimana suatu bakteri memiliki
persyaratan
khusus
dalam
pemenuhan
kebutuhannya
seperti
ketersediaan air, ketersediaan oksigen, serta ketersediaan unsur-unsur yang lain di dalam lingkungan yang mendukung, baik Ph, suhu, atau kelembaban. Dalam memulai inokulasi perlu memperhatikan kondisi optimal dari tiap-tiap bakteri. Informasi ini dapat dijadikan pedoman untuk melakukan inokulasi pada proses retting pelepah tanaman salak (Zalacca edulis, Reinw.) atau sumber serat alami lain. Penelitian lebih lanjut perlu dilakukan untuk menguji aktivitas bakteri secara langsung dalam menghidrolisis komponen-komponen polisakarida pengikat serat khususnya selulosa dengan berbagai konsentrasi inokulum serta berbagai kondisi suhu lingkungan. KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan Berdasarkan hasil penelitian dan pembahasan maka dapat diambil kesimpulan : a Diperoleh tujuh isolat bakteri yang potensial sebagai bakteri selulolitik. b Isolat bakteri kode S1, S5, S6, S7 berbentuk irregular, sedangkan S2, S3, S4 berbentuk circular. S1, S2, S4, S6, S7 berwarna putih susu sedangkan S3 dan S5 putih kekuningan. S1 bertepi lobate, S2 bertepi rata, S5, S6 bertepi
undulate, sedangkan S3, S4, S7 bertepi filiform. Semua isolat bakteri memiliki elevasi cembung. Bentuk sel secara mikroskopis adalah cocus. S1, S5, S7 merupakan jenis bakteri gram-positif sedangkan S2, S3, S4, S6 gram-negatif. Saran a Penelitian
ini
telah
mengidentifikasi
sampai
tahapan
karakter
makroskopis dan mikroskopis bakteri, maka perlu dilakukan penelitian lanjutan untuk mengetahui spesies bakteri selulolitik yang terdapat pada air rendaman pelepah tanaman salak. b Mengisolasi dan skrining bakteri indigenous dari air rendaman pelepah tanaman salak dari minggu I-VI. DAFTAR PUSTAKA Baharuddin, A.S., Razak, M.N.A., Hock, L.S., Ahmad, M.N., Aziz, S.A., Rahman, N.A.A. dan Shah, U.K.M., 2010. Isolation and Characterization of Thermophilic Cellulase-Producing Bacteria from Empty Fruit BunchesPalm Oil Mill Effluent Compost. American Journal of Applied Science, 7: 56-62. Balagurusamy, N. 1991. Caracterization of Thermophilic Anaerobic Cellulolitic Bacteria and Their Celluloses. Return XI Congreso Nacional de Biotecnologia Y Biogenieria. Fikrinida. 2000. Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Penghasil Selulase Ekstermofilik dari Ekosistem Air Hitam. Bogor: Tesis Program Pascasarjana IPB. Galbe, M. & Zacchi, G. 2007. Petreatment Of Lignocellulolitic Materials For Efficient Bioethanol Production. Adv biochem engine/biotechnol, 108,4165. Ibrahim A.S.S and Al Dewany. 2007. Isolation and Identification of New Cellulases Producing Thermophilic Bacteria from an Egyptian Hot Spring and Some Properties of the Crude Enzyme. Australian Journal of Basic and Applied Sciences, 1(4): 473-478 Shibata, M dan A. H. Osman. 1988. Feeding Value of Oil Palm by-product 1. Nutrient Intake and Physiological Responses of Kedah-Kelantan Cattle. Jarq 22: 77-84.
