Seminar Nasional Peternakan don Veteriner 1998
UJI IN VITRO PUTIH
TELUR TERHADAP BAKTERI GRAM POSITIF DAN GRAM NEGATIF ANDRIANi
dan
SOERIPTO
Balai Penelitian Veteriner Jalan R.E. Martadinata 30, P.O. Box 151, Bogor 16114 ABSTRAK Putih telur atau albumin telur diketahui memiliki zat aktif yang bersifat bakterisidal . Untu mengetahui efektivitas putih telur sebagai antibakteri dilakukan penelitian terhadap beberap bakteri gram positif, gram negatif dan Mycoplasina gallisepticunt (MG). Penelitian dilakuka dengan menggunakan kertas cakram steril . Sebanyak 25 ul putih telur dengan konsentrasi I,U ; 2, atau 5% masing-masing diteteskan pada kertas cakram steril . Kertas cakram yang suda mengandung putih telur kemudian ditetAkan pada media agar atau mikoplasma agar yan masing-masing telah diinokulasi dengan bakteri gram positif, gram negatif atau Mikoplasnu Selanjutnya media ini diinokuasi pada sulnl 37°C selama 24 jam untuk media agar dan 3-7 lia untuk mycoplasma agar. Ulangan dilakukan sebanyak 2 kali. Hasil penelitian ini memperlillatka bahwa konsentrasi putih telur 1 sampai 5% secara in vitro dapat menghambat pertumbuhan gra ; positif dan MG tetapi tidak dapat menghambat pertumbuhan gram negatif. Kata kunci : Putih telur, bakteri gram positif, gram negatif, M. gallisepticunt PENDAHULUAN Pengobatan infeksi yang disebabkan oleh bakteri sampai Saw ini masill banyak dilakuka dengan menggunakan antibiotika. Penggunaan antibiotika dengan jenis yang sama secara ten menerus dapat menimbulkan implikasi menurunkan daya kerja obat atau Iebill jaull [al menimbulkan resistensi (SOERIPTO, 1996) . Dengan timbulnya resistensi pada bakteri terlladl antibiotika maka diperlukan obat yang memiliki daya kerja lebih kuat atau lebih baik yaitu dengt jalan meningkatkan dosis, kombinasi antibiotika atau penggtmaan altematif obat non konvension yang memiliki daya kerja bakterisidal. Putih telur atau albumin telur dengan enzim lisozim-nya diketahui memiliki daya antibakte et al., 1982; TAYLOR, 1983; ROBINSON, 1989) . Beberapa peneliti telah melaporkan bah% putih telur secara in-vitro dapat menghambat pertumbuhan bakteri Listeria ntonocvlogene Micrococcus luteus, Sarcina lutea, Bacillus subtilis, Biftdo bacteria dan Lactobacilli (WANG d; SHELEF, 1991 ; HEINE et al., 1995, BRAUN dan FEHLHABER, 1996) dan secara in-vivo pada nlcrn dapat menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli (KIMURA et al., 1995) . Efektivitas put telur terhadap mikoplasma sampai saat ini belum pernah dilaporkan. (JAWETS
Tujuan dari penelitian ini untuk mengetalrai efek putih telur secara in vitro terhad pertumbuhan bakteri gram positif Micrococcus sp., Staphylococcus sp. dan Streptococcus sp., d bakteri gram negatif E. coli, Shigella sp. dan Sahnonella enteritidis serta Al coplast gallisepticum (MG). MATERI DAN METODE Isolat Dalam penelitian ini digunAan bakteri gram positif (Micrococcus sp., Staphvlococc aureus dan Streptococcus sp.) gram negatif (E. coli, Shigella sp. dan S. enteritidis) dan 2 iso 964
Seminar Nasional Peternakan dan Veteriner 1998
Mycoplasma gallisepticunt yaitu isolat luar MG-S6 dan isolat lokal MG-88016 . Senwa isolat tersebut yang diperoleh dari laboratorium bakteriologi, Balai Penelitian Veteriner . Putih telur dan antibiotika Putih telur ayam diencerkan dalam aquades steril dengan konsentrasi 1,0%; 2,5% dan 5,0 %. Sebanyak 25 ul dari masing-masing pengenceran putih telur diteteskan pada kertas cakram steril dan didiamkan sampai kering dalam kabinet biohazard selama 10-15 menit. Sebelum digunakan kertas cakram yang sudah diberi putih telur dimasukkan dalam botol Mc.Cartney steril kemudian disimpan di dalam lemari es. Sebagai pembanding pengujian digunakan antibiotika enrofloxacin dengan konsentrasi 5 ul . Media Untuk pertumbuhan, perbanyakan dan pengujian bakteri gram positif dan gram negatif digunakan media agar nutrien dan Mueller-Hinton, sedangkan untuk kutnan MG digunakan media mikoplasma cair dan padat . Kertas eakram Kertas cakram (Whattnan AA disc) dengan ukuran 6 turn yang inampu inenampung 25 ul cairan disterilkan lebih dahulu sebelum dipergunakan dalam pengujian . Cara kerja Masing-masing kultur yang akan digunakan dibiakkan terlebilh dahulu dalam niedia agar nutrien selama 24 jam . Setelah tumbuh, beberapa koloni diambil sebagai inokulurn biakan yang akan digunakan . Kekeruhan biakan yang akan dipergunakan diatur sesuai atau secara dengan kekeruhan larutan Mc.Farland No. 0,5. Setelah sesuai kemudian diinokulasikan pada niedia agar Mueller-Hinton dengan cara dituangkan supaya pertumbuhan bakteri dapat inerata . Media dibiarkan mengering dalam kabinet biohazard selama 10-15 menit. Setelah kering, diletakkan kertas cakram yang sudah mengandung putih telur yang akan diuji secara duplikasi . Sebagai pembanding kertas cakram yang sudah mengandung antibiotika enrofloxacin juga diletakkan secara terpisah dari putih telur di atas permukaan media agar yang sudah mengandung bakteri yang akan diuji . Media agar yang sudah berisi biakan dan kertas cakram kemudian diinkubasikan pada suhu 37°C dan diukur diameter daerah hambatan pertumbuhannya setelah 24 jam inkubasi . Untuk pertumbuhan mikoplasma dilakukan pada media mikoplasma cair dan diinkubasikan pada suhu 37°C sampai terjadi perubahan warna media dari merah kekuning-kuningan . Inokuhnn yang digunakan yaitu biakan mikoplasma dengan pengenceran 10 -4 . Biakan dituangkan pada media mikoplasma agar kemudian dibiarkan sampai kering di dalarn kabinet biohazard. Setelah kering, kertas cakram yang sudah mengandung konsentrasi putih telur diletakkan di atasnya secara duplikasi . Media agar ini kemudian diinkubasikan secara inikroerophilik pada suhu 37°C selama 3-7 hari sampai pertumbuhan koloni inikoplasina dapat diamati . Diameter daerah hambatan pertumbuhan diukur dengan menggunakan penggaris . HASIL Hasil uji hambatan putih telur dan enrofloxacin terhadap bakteri gram positif, grant negatif dan MG dapat dilihat pada Tabel 1 dan Gambar 1 dan 2 . Putilt telur dapat menghantbat 965
SeminarNasional Peternakan dan Veteriner 1998
pertumbuhan bakteri gram positif dengan variasi diameter daerah hambatan antara 8 sampai 22 mm. Makin tinggi konsentrasi putill telur yang digunakan makin besar daerall hambatan pertumbuhan yang dibentuk. Micrococcus sp memperlihatkan daerah hambatan pertunlbullan yang lebih besar dibandingkan kedua bakteri gram positif lainnya, sedangkan Streptococcus sp. memperlihatkan daerah hambatan pertumbuhan yang terkecil . Putill telur dapat mengllambat pertumbuhan Mycoplasma gallisepticum dengan variasi hambatan pertumbuhan antara 15 sampai 28 mm tergantung pada besar konsentrasi putih telur yang digunakan . Pada pengujian terhadap bakteri gram negatif, putih telur tidak memperlihatkan daerah hambatan pertumbuhan . Tabel 1. No.
1
Hasll uji hambatan pertumbuhan dengan zat putih telur dan enrofloxacin
Jenls bakteri Gram positif
1 %
Rata-rata diameter hambatan (mm) Zat putih telur Enrolloxacin 2,5%
5
Micrococcus sp
19
20
22
30
2
Staphylococcus aureus
14
16
19
32
3
Streptococcus sp .
8
9
10
25
4
Gram negatif
Escherichia coli
0
0
0
45
5
Shlgella sp .
0
0
0
40
6
Salmonella enteritidis
0
0
0
34
M. gallisepticum S6
20
22
28
62
M.gallisepticum 88016
15
20
22
62
7 8
Mycoplasma
Sebagai pembanding digunakan antibiotika enrofloxacin. Hasil uji memperlihatkan baliw, enrofloxacin dapat mengllambat pertumbuhan sennla bakteri gram positif, gram negatif dan MC yang besar diameter daerah hambat pertumbuhannya bervariasi antara 25 sampai 62 mnl . PEMBAHASAN Putih telur dipilili sebagai pengganti antibiotika karena diketalud bahwa di dalam putill telui mengandung enzim lisozim yang memiliki sifat antibakteri (ROBINSON, 1989) . Sebagai antibakter dijelaskan bahwa lisozim memiliki kemampuan untuk menghidrolisa peptidoglikan yanl merupakan komponen dari dinding sel bacteria (ROBINSON, 1989; JAWETS et al., 1982) . Pada penelitian ini diperolell hasil bahwa putill telur pada konsentrasi 1,0 ; 2,5 dan 511 mampu untuk menghambat pertumbuhan bakteri gram positif Nlicrococcus sp., Staplrvlococcu. aureus dan Streptococcus sp . Penelitian ini sesuai dengan hasil penelitian yang telah dilakukal oleh peneliti sebelumnya (WANG dan SHELEF, 1991 ; HEINE et al., 1995; BRAUN dan FEIIIAiABER 1996) yang mendemonstrasikan hambatan pertumbuhan terhadap bakteri gram positif Listerii monocytogenes, Micrococcus luteus, Sarcina lutea, Bacillus subtilis, Bifido bacteria dai Lactobacilli . Pada penelitian ini nlemperlillatkan hasil yang lebill sensitif dibanding dengai penelitian sebelumnya di mana dengan konsentrasi 1% sudah mampll untllk nleninlbulkal hambatan pertumbuhan (Gambar 1) sedangkan peneliti lain (WANG dan SHELEF, 1991 menggunakan konsentrasi 15% untuk menghambat pertumbuhan Listeria inonocvtogene . Untul 966
Senunar Nasional Peternakan don Veteriner 1998
membuktikan adanya efek bakteriolisis terhadap bakteri Bifidobakteria clan Laktobacilli (WINE et al., 1995) langsung menggunakan enzym lisozim dengan dosis 5, 50 clan 500 mg lisozini/L . Sebaliknya, pada penelitian ini putih telur tidak dapat menghambat pertumbuhan bakteri grain negatif Hasil ini nampaknya sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh BRALTN clan FE111 .11ABER (1996) dimana putih telur hanya memberikan efek hambatan pertumbuhan yang sangat kecil terhadap S. enteritidis. Tidak terjadinya hambatan pertumbuhan terhadap bakteri gram negatif kemungkinan karena lapisan peptidoglikan yang terdapat pada dinding sel bakteri gram negatif lebih tipis clan tekanan osmotik di dalam dinding sel lebih kecil dibandingkan dengan dinding sel bakteri gram positif (ROBINSON, 1999) . Kemungkinan lain konsentrasi putih telur yang digunakan pada penelitian ini terlalu kecil sehingga tidak mampu untuk menghambat pertumbuhan bakteri gram negatif Untuk mengetahui efektivitas putih telur dengan dosis lebili besar cliperlukan penelitian lebih lanjut .
Gambar 1. Efek 1% putih telur terhadap pertuinbuhanHicrococcus sp . Hambatan pertumbuhan yang terjadi terhadap MG baik terhadap isolat lokal mmnipun luar memperlihatkan daerah hambatan yang cukup besar yaitu antara 15 mm sampai 28 mm. Hal ini sangat menarik karena MG diketahni tidak memiliki dinding sel, hanya clikelilingi oleh sclaput membran clan ticlak mampu mensintesa peptidoglikan (RAZIN clan FREUNDT, 1984; YODER, 1991) . Menurut NCCLS (1984) untuk enrofloxacin, daerah hambatan pertumbuhan clikatakan sensitif apabila diameter hambatan yang terjacli sama dengan atau lebili besar dari 17 nun . Dengan mengacu pada NCCLS, jika dibandingkan dengan enrofloxacin maka hasil penelitian ini memperlihatkan bahwa konsentrasi 1% putih telur suclah memperlihatkan kepekaan terhadap MG isolat luar clan Miicrococcus sp., sedangkan pada konsentrasi 5% kepekaan terlihat pacla kedua isolat MG, Micrococcus sp. dan Staphylococcus aureus. 967
Seminar Nasional Peternakan don Veteriner 1998
Gambar 2. Efek 2,5 % putih telur terhadap pertumbuhan MG S6 Hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa putih telur ayam dengan konsentrasi 1 sampai 5% secara in vitro dapat menghambat pertumbuhan bakteri gram positif dan MG, tetapi tidab dapat menghambat pertumbuhan bakteri grain negatif. DAFTAR PUSTAKA and K. FErn .HABER. 1996 . Studies on the inhibitory effect of egg albumen on gram positive bacteru and on Salmonella enteritidis strains. Archiv fur Geflugelkunde 60 : 203-207 .
BRAUN, P.
and P. LEITZMANN. 1995 . Enhancement of lysozyme trypsin-mediate decay of intestinal bifidobacteria and lactobacilli . J. Pediatric GastroenteroloKy and Nutrition. 21 : 54 58.
HEINE, W., O.H . BRAUN, C . MOHR,
and E.A . ADELBERG. 1982 . Revie w ofMedical Microbiology . Diterjemallkan ole dengan judul buku Mikrobiologi untuk Profesi Kesehatan. Edisi 14 . Lange Medici Publications . USA. pp. 149-188.
JAWETZ, E., J.L ., MELNICK, G. BONANG
and S. ARAKI . 1995 . Effect of oral administration of fermented egg white powder c Escherichia coli infection in itmmmosuppressant-treated mice . Animal Sci. Technol. 61 experimental 770-772.
Km4uRA, M., M. SuzuKi,
and E.A . FREUNDT. 1984 . Th e Mycoplasnias . In : Bargey S Manual of Systemic Bacteriolog Volume l . Edit by N.R . KRIEG and J.G . HOLT . Williams and Wilkins. Baltimore/London . pp . 740-79
RAzIN, S .
1989 . Chapter 11 . The chemical basis of albumen quality. In : Egg Oualitv-Current Problems ai Recent Advances. Edit by R.G . WELLS and C .G . BELYAVIN . Butterworths . London, Boston, Singapoi Toronto, Wellington . pp . 179-191 .
ROBINSON .
SOERIPTO .
96 8
1996 . Resistance pattern of microbial agents in the livestock production . LARD Journal 18 : 77-95
Seminar Nosional Peternakan dan Veteriner 1998 TAYLOR, P.W .
1983 . Bactericidal and bacteriolytic activity of serum against gram negative bacteria .
Microbiol. Review. 47 : 46-83 .
WANG, C . and L .A . SHELEF . 1991 . Factors contributing to antilisterial effects of raw egg albumen . J. Food Sci . 56 : 1251-1254 . YODER, H .W .Jr . 1991 . Mycoplasmosis. In : Diseases of Poultry. 9th ed. B .W . CALNEK, H .J . BARNES, C .W . BEARD W .M . REID, and H .W. YODER Yr ., eds. Iowa State Univ . Press, Ames, Iowa . pp . 196-198 .
